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測定原理:
利用樣品各種氨基酸組分的結(jié)構(gòu)不同、酸堿性、極性及分子大小不同,在陽離子交換柱上將它們分離,采用不同pH值離子濃度的緩沖液將各氨基酸組分依次洗脫下來,再逐個(gè)以另一流路的茚三酮試劑混合,然后共同流至螺旋反應(yīng)管中,于一定溫度下(通常為115~120℃)進(jìn)行顯色反應(yīng),形成在570nm有最大吸收的藍(lán)紫色產(chǎn)物。其中的羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物,其最大吸收在440nm。
經(jīng)過處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。上柱的樣品量根據(jù)所用自動(dòng)分析儀的靈敏度來確定。一般為每種氨基酸0.1μmol 左右(水解樣品干重為0.3mg 左右)。測定必須在pH5~5.5、100℃下進(jìn)行,反應(yīng)進(jìn)行時(shí)間為10~15min,生成的紫色物質(zhì)在570nm 波長下進(jìn)行比色測定。而生成的黃色化合物在440nm 波長下進(jìn)行比色測定。做一個(gè)氨基酸全分析一般只需1h 左右,同時(shí)可將幾十個(gè)樣品一起裝入儀器,自動(dòng)按序分析,最后自動(dòng)計(jì)算給出精確的數(shù)據(jù)。儀器精確度在±1~3%。用陽離子交換柱分離及測定氨基酸。
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